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苏州医工所在血液制品细菌污染核酸检测方面取得进展

苏州医工所在血液制品细菌污染核酸检测方面取得进展

  目前,核酸筛检系统(Nucleic Acids Testing,NAT)已广泛用于血制品常规病原体(乙肝、丙肝、艾滋、梅毒)的核酸检测,极大降低了相关疾病的输血传播。但是,在输血感染性风险中,血小板的细菌污染及相关败血症性输血反应仍是棘手的问题。将核酸筛检技术用于细菌污染检测还有不少困难,包括:1、细菌污染不像特定病原体,没有统一的标准品;2、缺少合适的内参质控排除假阳性或假阴性结果;3、核酸扩增聚合酶(Taq)大多是细菌来源,带有痕量的细菌核酸成分。

  近期,中国科学院苏州生物医学工程技术研究所血液免疫学研究中韩式1.5分彩官网心提出一种双重荧光定量PCR方法可提高细菌污染检测的可靠性:设计一条人工核酸序列(IRC)作为内参,其特点是IRC与靶基因共用同一对引物进行扩增,分别用不同荧光探针进行检测。通过精确控制IRC分子数达到阳性检出限,以其Ct(i)值作为阈值,只有样本检测的韩式1.5分彩玩法Ct(s)值小于或等于Ct(i)时,检测结果才可认定为阳性。一种双样本混合的t测验(two samples pooled t-test)统计学方法可用于帮助判断两个Ct值的大小。IRC还可以包装成噬菌体,用于监控核酸样本提取过程。

  此外,该双韩式1.5分彩历史开奖重荧光定量PCR方法可通过分别检测细菌的DNA(脱氧核糖核酸)与RNA(核糖核酸),计算不同Ct的比值,能判断细菌是处于生长繁殖期或者已经是死菌,从而帮助判断血制品灭活的效果。该方法不仅能用于血制品细菌污染检测,理论上也能开发成其他外源基因核酸定量检测的有效方法。

  相关研究结果已发表在PLOS ONE(2015,10(7):e0134743)上。 

  以上工作得到江苏省自然科学基金、苏州市科技专项项目的支持。

  文章链接

图-1、IRC双重荧光定量PCR原理图

图-2、IRC双重荧光定量PCR性能测试